我院PCR实验室顺利建成并投入使用

如何建立标准的PCR实验室？PCR实验室如何设计计划是专业的？PCR实验室管理有什么注意事项？本文从0开始理解PCR实验室的计划设计。

一、PCR实验室分区

标准的PCR实验室分为4个区域，分别为

n1.试剂配制区域

n2.样品处理区域；

n3.核酸扩张区域

产物分析区域

核酸扩张区域

(进入各工作区必须严格按单向进行，不同工作区使用不同的工作服，如颜色。工作人员离开各工作区时，不得带出工作服)

二、PCR实验室平面布局

试剂准备区:扩大试剂的配置、分装和保存

样品处理区:样品注册、分装核酸提取、保存和样品

扩大产物分析区:扩大产物的测定、结果分析、注册和报告

扩张前区和扩张后区应严格分开，使用不同的房间，两区之间最好有一定的间隔

使用商品化试剂盒可在样品处理区进行少量试剂配制

在满足以下操作和清洁处理要求的前提下，样品处理区域的准备区域可以设置在同一个房间内:

在生物安全柜内操作的

每个实验者、实验组分别使用各自的试剂和消耗品#

放置污染材料的器密封并一次性使用。

pcr实验室建设计划要点

将PCR过程分为试剂准备、标本准备和PCR扩展检查三个独立的实验区。整个区域都有整体缓冲走廊。各独立实验区设有缓冲区，同时各区通过气压调节，在PCR实验中试剂和标本不受气溶胶污染，减少扩大产物对人员和环境的污染

可开缓冲区I，缓冲区ii和PCR扩大区的排气扇向外排气，实验区的外墙和各门都设置了风量可调的回气口，空气通过回气口向室内通风

在三个实验区和三个缓冲区的上部和传输窗内部设置紫外线灯，供消毒

在试剂备考区和标本制备区，还设置了移动紫外线灯，对实验桌进行局部消毒

试剂和标本通过机械连锁不锈钢(不推荐电子连锁方式)传输窗口，保证试剂和标本在传输过程中不受污染(人物分流)

照明器具选择净化照明器具，具有清洗方便、不积尘的特点。

PCR实验室核酸检测这个小细节不能忽视！

三、设计要点

PCR实验室可以是分散形式，也可以是组合形式。完成一组PCR实验，通常经过试剂配制、样品处理、核酸扩张和产物分析四个实验过程，如果需要实验过程，还需要增加样品粉碎过程。

所谓分散形式PCR实验室，是指完成上述实验过程的实验室相距甚远，呈分散布置形式。对于这种布局形式的PCR实验室，每个实验之间都不容易相互干扰，所以不需要特殊的条件要求。

所谓组合形式PCR实验室是指完成PCR四个实验过程的实验室相邻配置，构成独立实验区域的形式。组合形式的PCR实验室，由于各实验之间的集中配置容易引起相互干扰，因此对整体配置和屏障系统有一定的要求。各室在入口处设置缓冲间，减少室内外空气交换。

试剂调配室和样品处理室应微正压，防止外部含有核酸气溶胶的空气进入，造成污染的

核酸扩张室和产物分析室应呈微负压，防止含有核酸的气溶胶扩张污染试剂和样品，控制排气量比吸气量大，达到负压效果。

理想的情况下，PCR实验室缓冲间内，可设置正压，使室内空气不流向室外，室外空气不流向室内。PCR实验室的吸气由原来的中央空调控制，要求将中央空调的吸气口设置在指定点，高度铺在地板上后2600mm。

使用荧光PCR仪，扩展室和产物分析室可合并。

如果房间深入允许，可以设置PCR内部的专用走廊。需要指出的是，在减少室内外空气交换方面，缓冲间比专用走廊更有意义。

各地区之间应具备单向的实验流程、物流、人流和气流，形成单向流程的保护屏障，避免实验之间的相互干扰，防止核酸气溶胶对实验过程造成的污染产生假性结果。

实验室的墙壁，包括天花板在内，结构牢固，气密性好，所有阴角都应采用圆弧线过渡的墙壁内壁清洁，不吸附，耐腐蚀，容易清洗消毒的地板材料

仪器设备主要有冰箱、超净台、打样机、混匀机、天平和离心机等，打样机、天平除专用外，还应定期校准。试剂分装应在超净台进行，扩大反应混合液应使用分子生物学级，试剂制作后应进行质量检查。一个是否有污染，二个是检查试剂的扩大效果。

仪器设备主要包括生物安全柜、加样器、离心机、温育器、混合器等

扩展区的主要仪器是核酸扩展器、超净台、微量增加器、可动紫外灯。扩展器需要校准。配备UPS电源，防止电压变动，停电影响扩大效果。

本区使用的仪器设备有酶标仪、洗板机、样品器和水浴箱等洁净实验区的缓冲间面积不得超过主实验室的八分之一。

四、一些琐碎、不可忽视的设计

PCR实验室没有严格的净化要求，但为了避免各实验区间的交叉污染，应采用全排气流组织形式。同时，要严格控制输送、排气的比例，保证各实验区的压力要求。

PCR实验室设计的核心问题是如何避免污染。在实际工作中，常见的有扩大产物污染的天然基因组DNA污染的试剂污染和标本之间的污染。一旦发生污染，实验必须停止，直到找到污染源，实验结果必须无效，必须重新进行实验。因此，污染发生后，围绕实验室寻找污染源不仅花费时间，而且麻烦，浪费人力物资。为了避免污染，必须首先预防，而不是排除。

(1)严格控制进出实验室的人员。与实验无关的人员不得擅自进出实验室。有条件时，必须设置独立的通道和进出整个实验区的门。

(2)尽量减少实验区内不必要的行走，减少交叉污染的可能性。

(3)扩大产物分析区是最主要的扩大产物污染源，废液不能倒入实验室，必须用消毒液浸泡消毒后，在远离实验室的地方放弃，使用的吸引器等一次性材料也必须用消毒液浸泡消毒后进行统一处理，如焚烧等3.5完善的实验室辅助设施，完善的实验室辅助设施是保证实验作业的必要条件，必须根据各实验室的实验内容配备相应的设备和仪器。